Mikroskop fluoresensi telah merevolusi kemampuan kita untuk memvisualisasikan dan mempelajari spesimen biologis, memungkinkan kita mempelajari dunia sel dan molekul yang rumit.Komponen kunci mikroskop fluoresensi adalah sumber cahaya yang digunakan untuk merangsang molekul fluoresen dalam sampel.Selama bertahun-tahun, berbagai sumber cahaya telah digunakan, masing-masing dengan karakteristik dan keunggulan uniknya.
1. Lampu Merkuri
Lampu merkuri bertekanan tinggi, berkisar antara 50 hingga 200 watt, dibuat menggunakan kaca kuarsa dan berbentuk bola.Ini mengandung sejumlah merkuri di dalamnya.Saat beroperasi, terjadi pelepasan muatan antara dua elektroda, menyebabkan merkuri menguap, dan tekanan internal di dalam bola meningkat dengan cepat.Proses ini biasanya memakan waktu sekitar 5 hingga 15 menit.
Emisi lampu merkuri bertekanan tinggi dihasilkan dari disintegrasi dan reduksi molekul merkuri selama pelepasan elektroda, yang menyebabkan emisi foton cahaya.
Ia memancarkan sinar ultraviolet dan biru-ungu yang kuat, sehingga cocok untuk menarik berbagai bahan fluoresen, itulah sebabnya ia banyak digunakan dalam mikroskop fluoresensi.
2. Lampu Xenon
Sumber cahaya putih lain yang umum digunakan dalam mikroskop fluoresensi adalah lampu xenon.Lampu Xenon, seperti lampu merkuri, memberikan spektrum panjang gelombang yang luas dari ultraviolet hingga inframerah dekat.Namun, keduanya berbeda dalam spektrum eksitasinya.
Lampu merkuri memusatkan emisinya di wilayah yang mendekati ultraviolet, biru, dan hijau, sehingga menghasilkan sinyal fluoresen yang terang namun disertai dengan fototoksisitas yang kuat.Akibatnya, lampu HBO biasanya disediakan untuk sampel tetap atau pencitraan fluoresensi lemah.Sebaliknya, sumber lampu xenon memiliki profil eksitasi yang lebih halus, memungkinkan perbandingan intensitas pada panjang gelombang berbeda.Karakteristik ini menguntungkan untuk aplikasi seperti pengukuran konsentrasi ion kalsium.Lampu Xenon juga menunjukkan eksitasi yang kuat pada rentang inframerah dekat, khususnya sekitar 800-1000 nm.
Lampu XBO memiliki keunggulan dibandingkan lampu HBO:
① Intensitas spektral lebih seragam
② Intensitas spektral yang lebih kuat di wilayah inframerah dan inframerah tengah
③ Keluaran energi lebih besar, sehingga lebih mudah mencapai bukaan objektif.
3. LED
Dalam beberapa tahun terakhir, pesaing baru telah muncul di bidang sumber cahaya mikroskop fluoresensi: LED.LED menawarkan keunggulan peralihan hidup-mati yang cepat dalam hitungan milidetik, mengurangi waktu pemaparan sampel, dan memperpanjang masa pakai sampel halus.Selain itu, lampu LED menunjukkan peluruhan yang cepat dan tepat, sehingga secara signifikan mengurangi fototoksisitas selama percobaan sel hidup jangka panjang.
Dibandingkan dengan sumber cahaya putih, LED biasanya memancarkan spektrum eksitasi yang lebih sempit.Namun, tersedia beberapa pita LED, memungkinkan aplikasi fluoresensi multi-warna yang serbaguna, menjadikan LED pilihan yang semakin populer dalam pengaturan mikroskop fluoresensi modern.
4. Sumber Cahaya Laser
Sumber cahaya laser sangat monokromatik dan terarah, menjadikannya ideal untuk mikroskop resolusi tinggi, termasuk teknik resolusi super seperti STED (Stimulated Emission Depletion) dan PALM (Photoactivated Localization Microscopy).Sinar laser biasanya dipilih agar sesuai dengan panjang gelombang eksitasi spesifik yang diperlukan untuk fluorofor target, sehingga memberikan selektivitas dan presisi tinggi dalam eksitasi fluoresensi.
Pilihan sumber cahaya mikroskop fluoresensi bergantung pada persyaratan eksperimen spesifik dan karakteristik sampel.Jangan ragu untuk menghubungi kami jika Anda memerlukan bantuan
Waktu posting: 13 Sep-2023