Mikroskop fluoresensi adalah jenis mikroskop optik yang menggunakan sumber cahaya intensitas tinggi untuk menerangi spesimen dan merangsang fluorokrom dalam sampel.Penerangan spesimen biasanya dilakukan dengan sumber cahaya yang memancarkan sinar ultraviolet.Mereka banyak digunakan dalam bidang biologi, medis dan industri.
Bagaimana cara kerja mikroskop fluoresensi?
Mikroskop fluoresensi menggunakan lampu merkuri atau xenon untuk menghasilkan sinar ultraviolet.Cahaya masuk ke mikroskop dan mengenai cermin dichroic - cermin yang memantulkan satu rentang panjang gelombang dan memungkinkan rentang panjang gelombang lainnya melewatinya.Cermin dichroic memantulkan sinar ultraviolet sampai ke spesimen.Beberapa spesimen berpendar secara alami di bawah sinar ultraviolet karena mengandung zat berpendar seperti klorofil.Jika spesimen yang akan dilihat tidak berpendar secara alami, spesimen tersebut dapat diwarnai dengan pewarna fluoresen yang disebut fluorokrom.
Mikroskop fluoresensi terdiri dari apa?
1. Sumber Cahaya
Sumber cahaya yang paling umum adalah merkuri, xenon, dan LED.Merkuri memberikan kualitas cahaya terbaik untuk mikroskop fluoresensi.LED menjadi lebih populer karena lebih murah dibandingkan sumber lain dan mengkonsumsi lebih sedikit daya.
| Lampu Merkuri | Lampu Xenon | DIPIMPIN | |
| Panjang Gelombang Cahaya yang Dipancarkan | 350-370nm | 400nm～ 450nm | 400-700nm |
| Seumur hidup (jam) | 200-300 | 400-600 | 10.000 |
| Keuntungan | 1. Cahaya Intensitas Tinggi, Sumber Cahaya Paling Umum. 2. Memancarkan sinar ultraviolet dan biru-ungu yang kuat untuk merangsang semua jenis fluorofor. 3. Gambar cerah dan berwarna. | 1. Intensitas spektral stabil. 2. Intensitas spektral yang kuat pada inframerah dan inframerah tengah. | 1. Mudah diganti. 2. Tidak perlu pemanasan. 3. Dapat dinyalakan dan dimatikan secara instan. 4. Kontrol intensitas sumber cahaya. |
| Kerugian | 1. Seumur Hidup yang Singkat. 2. Waktu pemanasan yang lama. | 1. Kotak daya DC tegangan rendah khusus diperlukan untuk panas berlebih. 2. Lebih Mahal dari Lampu Merkuri | 1. Sinar UV lebih lemah dibandingkan lampu merkuri. 2.Setiap panjang gelombang cahaya memerlukan LED terpisah karena sempitnya bandwidth yang dipancarkannya. |
Lampiran Merkuri Fluoresen
Perlengkapan Neon LED
2. Filter Eksitasi
Filter eksitasi sangat penting untuk pengoperasian mikroskop fluoresensi.Ia melewatkan cahaya dengan panjang gelombang lebih pendek, yang dapat diserap oleh pewarna fluoresen.Selain itu, ini menghalangi sumber cahaya menarik lainnya.
Filter Eksitasi (B,G,U,V)
3. Cermin Dikroik
Cermin dichroic adalah jenis filter optik yang memantulkan cahaya pada panjang gelombang tertentu dan mentransmisikan cahaya lainnya.Ini digunakan dalam mikroskop fluoresensi untuk memisahkan panjang gelombang eksitasi dan emisi.
4. Filter Emisi
Filter emisi hanya melewatkan panjang gelombang yang dipancarkan oleh fluorofor dan memblokir semua cahaya yang tidak diinginkan di luar pita ini – terutama panjang gelombang eksitasi.
5. Pewarna neon
Pewarna fluoresen adalah senyawa organik yang memiliki sifat fluoresensi, yang dengannya pewarna tersebut dapat membentuk gambar fluoresen dengan memancarkan cahaya hijau tampak yang sangat kontras setelah tereksitasi oleh sinar ultraviolet yang sangat terang.Pewarna fluoresen yang umum digunakan adalah;DAPI (49,6-diamidino-2-phenylindole), acridine orange, auramine-rhodamine, Alexa Fluors, atau DyLight 488.
Berapa banyak jenis mikroskop fluoresensi?
1. Mikroskop Epifluoresensi Tegak:
Ini adalah jenis mikroskop fluoresensi yang paling umum.Eksitasi fluorofor dan deteksi fluoresensi dilakukan melalui jalur cahaya yang sama (yaitu melalui tujuan).Mayoritas mikroskop fluoresensi, terutama yang digunakan dalam ilmu kehidupan, memiliki desain epifluoresensi.
Mikroskop Biologi Fluoresen Penelitian BS-2081F
2. Mikroskop Fluoresensi Konfokal:
Mikroskop Fluoresensi Confocal: Mikroskop fluoresensi jenis ini menggabungkan pemindaian laser dengan penerangan fluoresen untuk menghasilkan gambar.Ini dapat digunakan dalam berbagai aplikasi, seperti mempelajari sel dan jaringan, mendeteksi protein dan zat lain di dalam sel, dan mengukur ketebalan bahan.
Mikroskop Biologi Fluoresen Penelitian BS-2081F
3. Mikroskop Fluoresensi Terbalik
Sumber cahaya dan kondensor mikroskop ini letaknya di bagian atas menghadap ke bawah.Sudut iluminasi harus 90 derajat terhadap permukaan benda uji yang diperiksa.
Mikroskop Fluoresen Terbalik BS-2095F
Apa kelebihan dan kekurangan mikroskop fluoresensi?
Keuntungan:
- Memungkinkan pengamatan sel dalam organisme hidup tanpa merusaknya
- Memberikan gambar resolusi tinggi dengan warna yang akurat
- Memungkinkan untuk mempelajari proses hidup dalam sel
- Digunakan untuk mengidentifikasi berbagai jenis molekul di dalam sel, seperti protein atau asam nukleat.
Kekurangan:
-Ini hanya memungkinkan pengamatan struktur tertentu di dalam sel yang ditandai dengan pewarna fluoresen.
-Pemutihan foto akibat eksitasi elektron selama proses fluoresensi dapat mempengaruhi molekul reaktif pewarna fluoresen.Akibatnya, pewarna reaktif mungkin kehilangan sifat kimianya berupa intensitas emisi fluoresensi.
-Sel rentan terhadap efek fototoksik setelah pewarnaan dengan pewarna fluoresen, karena molekul fluorofor menyerap foton berenergi tinggi dari cahaya dengan panjang gelombang pendek.
Apa kegunaan mikroskop fluoresensi?
Mikroskop fluoresensi banyak digunakan dalam berbagai bidang penelitian dan aplikasi termasuk biokimia, biologi sel, mikrobiologi, imunologi, dan kedokteran.
1. Di bidang biologi, mikroskop fluoresensi memungkinkan identifikasi komponen dan aktivitas seluler seluler dan submikroskopik secara akurat dan terperinci dengan bantuan pelabelan pewarna fluoresen.
2. Dalam bidang medis, mikroskop fluoresensi dapat menggunakan reagen fluoresen untuk mendeteksi keberadaan dan distribusi bakteri dan virus, atau untuk membantu memberi label pada target pembedahan untuk memudahkan pembedahan.
3. Dalam bidang mineralogi, mikroskop fluoresensi sering digunakan untuk mempelajari zat yang memiliki sifat fluoresensi spontan, seperti aspal, minyak bumi, batu bara, graphene oksida dan mineral lainnya.
4. Dalam ilmu material, mikroskop fluoresensi dapat digunakan dalam industri tekstil atau industri kertas untuk menganalisis bahan berbasis serat.
Waktu posting: 14 Maret 2023